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    免疫熒光
                                                              免疫熒光實驗流程

    一.脫蠟至水

    1.     二甲苯Ⅰ(8min)

    2.     二甲苯Ⅱ(8min)

    3.     無水乙醇和二甲苯1:1(5min)

    4.     無水乙醇(3min)

    5.     95%乙醇(3min)

    6.     85%乙醇(3min)

    7.     75%乙醇(3min)

    8.     PBS3

    二.抗原修復

    EDTA抗原修復液修復。

    抗原修復100  20min ; 自然冷卻至室溫。

    三.PBST2遍,PBS1遍。每次5min。

    四.用30%H2O2和甲醇配制3%H2O2溶液。每張切片加1滴,室溫下孵育10分鐘,以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS3遍。

    五.封閉  3-5%BSA或者1-2%FBS封閉30min

    六.除去封閉液,每張切片加1滴或50μl的第一抗體,室溫下孵育60分鐘或4℃過夜,建議參見每種抗體的說明書。

       抗體稀釋液: 1%FBS溶液(可以加0.01%疊氮鈉)

    七.洗一抗。PBS3遍,每次5min。

    八.孵二抗2h(室溫)FITC標記 山羊抗小鼠二抗1:500,CY3標記的山羊抗兔二抗1500。

    九.洗二抗   PBS3遍,每次5min

    十.擦干標本邊緣水分,加DAPI1ug/ml5min

    十一. 把片子放PBS里,取一張擦干水分,加moutingsigma M1289,蓋上蓋玻片,指甲油封片。

              

     

    滬公網安備 31010702003365號

    公安部備案號31010702003365

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