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    免疫組化

      

               免疫組化實驗步驟

    1.包埋好的標本用切片機切石蠟切片3um

    2.經60℃烘片1小時

    3.二甲苯Ⅰ脫蠟10分鐘

    4.二甲苯Ⅱ脫蠟10分鐘

    5.梯度酒精復水:100%酒精5分鐘,100%酒精5分鐘,95%酒精5分鐘,80%酒精5分鐘,自來水沖洗 5分鐘

    6.進行抗原修復:將切片置于0.1mol/Lph=6.0的枸櫞酸液修復液中,沸水浴20分鐘,停止加熱后自然冷卻20-30分鐘

    7. PBS 3分鐘3次,組畫筆畫圈,滴加雙氧水,孵育20min

    8 PBS 3分鐘3次,滴加封閉血清封閉1h

    9.甩干 ,滴加適宜濃度的一抗置濕盒中4℃孵育過夜

    10.用PBS 3分鐘×5次洗去一抗

    11.甩干,滴加二抗室溫置孵育盒中孵育1小時(注意二抗種屬,夏季30min,冬季1h

    12.用PBS 3分鐘×5次洗去二抗

    13.甩干,滴加DAB 顯色,水沖

    14.蘇木素染核5min (新配置的蘇木素視情況而定)

    15.流水沖洗多余的蘇木素,分化液中分化1

    16.流水沖洗5min

    17.梯度酒精復水:80%酒精5分鐘,95%酒精5分鐘,100%酒精5分鐘,100%酒精5分鐘,二甲苯Ⅱ透明5min,二甲苯Ⅰ透明5min(如為完全透明,可適當延長時間)

    18.用中性樹膠封片

    19.鏡檢

           

     

         

     

    滬公網安備 31010702003365號

    公安部備案號31010702003365

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